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组培消毒常用试剂 无菌及无菌操作!

优质内容 来源:山东组培试剂公司 时间:2021-06-27 23:47:59 浏览:

  今天我们来讲一下组培消毒常用试剂 无菌及无菌操作!组培消毒试剂:次氯酸钠(22元500ml),甲醛溶液(12元500ml ),高锰酸钾(22元500g),升汞(350元250g),新洁尔灭(12元500ml),过氧乙酸(28元一对甲溶液乙溶液各500ml) 这些店内都有销售,需要直接咨询客服!淘宝店不准销售,只有这里告诉大家噢!

  一、 灭菌及无菌操作

  植物组织培养成败的关键:保证无菌,避免污染。

  器皿和用具的洗涤(P28):玻璃器皿洗涤方法:先用碱洗,即用肥皂粉刷洗,用清水清洗,晾干。

  难洗的器具:需用铬酸-硫酸混合洗涤液浸泡,浸泡后用自来水冲洗,最后用蒸馏水冲洗。

  二、 培养基灭菌及培养基、植物材料的消毒

  (一)培养基的灭菌(高压灭菌)

  一般程序:

  1.按实验需求配制……

  2.……加水,防止干烧。

  3.将培养基瓶,所用的培养皿,接种用的器具,蒸馏水等需要灭菌的东西放入锅内。

  4.关上锅盖,拧紧。

  5.打开电源,开始加热,至100℃,3~5min。

  6.灭菌锅自动关上排气阀,开始加压,温度继续上升,温度到达121℃。

  7.维持此温度,压力维持0.1~0.2MPa下,保持10-20分钟。

  8.时间到后自动降压降温至100℃,压力为零。

  9.在94℃时切断电源,可打开锅盖,取出培养基冷却,灭菌完毕。

  灭菌最少时间:

  mLmin

  20~5015

  75~15020

  250~50025

  100030

  注意事项:①在灭菌之前一定要检查锅中的水位,严禁干烧,以免造成事故。

  ②灭菌前还需检查排气阀是否关上。

  ③只有当锅中压力为零时才能打开锅盖,否则会有危险。

  ④锅内应留有空隙,不能太满。

  ⑤灭菌时间不宜过长,也不可以超过灭菌锅规定的压力范围。

  (二)物体表面灭菌

  灭菌方式:喷雾、涂抹杀菌。

  范围:桌面、墙面、双手、材料表面。

  消毒剂:70%酒精;1-2%来苏水;0.25-1%新洁尔灭,洗衣粉;吐温-80。

  (三)接种工具灭菌

  用前干热灭菌 160-180℃,1.5-2.0h

  用前湿热灭菌 121℃,20-30min

  接种前用酒精棉球檫试,侵入95%酒精液中,并在酒精灯上灭菌。

  (四)实验服、口罩、滤纸灭菌

  湿热灭菌 121℃,20-30min

  ……

  (五)接种室灭菌

  紫外灯照射(接种室、超净台、接种箱):波长260nm,距离小于1.2m,2.-30min。

  臭氧灭菌机:1~2h。

  熏蒸灭菌:5-8mL/m3甲醛+5g/m3高锰酸钾;冰醋酸。

  接种台喷雾消毒:75%酒精。

  (六)培养室灭菌

  新建培养……

  隔2-5天用洗衣粉水或来苏水拖地一次,用高锰酸钾擦。

  三、无菌操作

  灭菌:用物理或化学方法,杀死物体表面积和孔隙内一切微生物或生物体,即所有有生命的物质全部杀死。

  消毒:杀死、  消除或抑制部分微生物,使之不发生作用。

 

灭菌剂名称

使用浓度%

清洗难易

灭菌时间

灭菌效果

酒精

70-75

0.1-3

Ca(ClO)2

910

530

氯化汞

0.1-0.2

较难

2-10

最好

 

常用化学消毒剂:

  酒精灭菌的原理:

  1) 酒精具有较强的穿透能力和杀菌力,它使细菌蛋白质变性。使用的浓度一般为70—75%。

  2) 处理时间15—30s,不宜太久,因此细胞容易收缩脱水。它具有浸润和灭菌双重作用,适用于表面消毒;

  3) 在乙醇溶液中加入0.1%的酸或碱,可提高杀菌效果。

  植物材料消毒程序:1)清洗(流动自来水冲洗数小时,洗衣粉毛刷等清洗);2)灭菌剂浸泡灭菌;3)无菌水清洗4、5次擦干;4)加表面活性剂(吐温-20或吐温-80,加强表面活性剂,磁力搅拌,超声振荡)。

  常规二次消毒法:材料先放入70%的乙醇中,约30s后再在0.1%的氯化银中浸泡,2—0min,或在2%次氯酸钠中浸泡20min,然后用无菌水冲洗3、4次。

  四、广谱实验法

  在广谱试验中,把培养基中所有组分分为4大类:无机盐、有机物质、生长素、细胞分裂素

  4类物质各3种浓度的自由组合即构成了3项包括81个处理的实验。

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